Transfer Gen SOD dengan Teknik Triparental Mating melalui vektor pRK2013 pada Transformasi Genetik Agrobacterium tumefaciens

Abstrak

Gen SOD adalah gen yang berperan menghasilkan enzim superoksida dismustase (SOD). Enzim SOD berperan penting sebagai penanda toleran cekaman abiotik baik cekaman kekeringan, salinitas, logam berat, maupun asam. Gen SOD dapat ditransfer ke Agrobacterium tumefaciens sebagai media transformasi ke berbagai tanaman. Transfer gen ada banyak teknik yang dapat digunakan salah satunya adalah triparental mating. Triparental mating menggunakan vektor berupa strain donor dan strain pembantu untuk transformasi bakteri A. tumefaciens sebagai strain penerima. Strain pendonor diketahui dari bakteri Escherichia coli DH5α yang membawa gen target dan strain pembantu berupa vektor pRK2013 dalam E. coli DH1. Vektor pRK2013 belum diteliti dan diketahui sebagai strain pembantu untuk transfer gen SOD pada bakteri Agrobacterium tumefaciens. Oleh karena itu, tujuan penelitian ini dilakukan untuk memasukkan gen SOD ke dalam bakteri Agrobacterium tumefaciens melalui vektor pRK2013 sebagai strain pembantu dalam triparental mating dan konfirmasi keberhasilannya. Metode penelitian yang digunakan adalah metode triparental mating dengan bakteri Escherichia coli DH5α, Escherichia coli DH1, dan Agrobacterium tumefaciens LBA4404. Bakteri Escherichia coli DH5α mengandung vektor ekspresi pGWB5-SOD sebagai strain donor. Bakteri Escherichia coli DH1 mengandung vektor pRK2013 sebagai strain pembantu. Bakteri Agrobacterium tumefaciens LBA4404 sebagai strain penerima. Hasil triparental mating diamati dari kultur bakteri yang tumbuh dan PCR koloni. Hasil penelitian menunjukkan triparental mating terkonfirmasi berhasil dengan pita muncul dari PCR koloni dan kultur bakteri tumbuh dalam media seleksi. Ini mengindikasikan bahwa transfer gen SOD ke bakteri A. tumefaciens berhasil melalui bantuan vektor pRK2013.