Introduksi Vektor Ekspresi pGWB5-SOD pada Bakteri Escherichia coli DH5α dengan Metode Kejut Panas

Abstrak

Transformasi bakteri adalah proses gen asing dimasukkan ke dalam sel bakteri dan mengekspresi gen tersebut. Proses transformasi bakteri melibatkan banyak metode, salah satunya adalah metode kejut panas. Metode kejut panas digunakan untuk meningkatkan kompetensi sel bakteri dan permeabilitas membrannya. Sehingga, gen asing dapat masuk ke dalam sel bakteri. Salah satu bakteri yang dapat digunakan untuk transformasi adalah Escherichia coli. Bakteri Escherichia coli secara umum digunakan dalam biologi molekuler sebagai bakteri uji. Bakteri Escherichia coli diketahui memiliki banyak strain, salah satunya adalah DH5α. Bakteri Escherichia coli DH5α merupakan strain yang mudah menerima gen asing. Karena mudah dibuat menjadi sel kompeten, tidak ada plasmid F, tidak ada enzim endonuklease 1 (mutasi gen endA1), dan memiliki penanda seleksi berupa resistensi antibiotik ampisilin. Transformasi bakteri Escherichia coli DH5α dengan vektor ekspresi pGWB5 mengandung gen SOD belum diteliti dan belum diketahui keberhasilannya. Sehingga, tujuan penelitian dilakukan untuk memasukkan vektor ekspresi pGWB5-SOD ke dalam bakteri Escherichia coli DH5α melalui metode kejut panas dan menganalisis ekspresinya melalui amplifikasi PCR koloni sebagai konfirmasi keberhasilan transformasi. Metode penelitian yang digunkan adalah metode kejut panas dengan vektor ekspresi pGWB5-SOD dan bakteri Escherichia coli DH5α. Transformasi bakteri dilakukan sebanyak 10 ulangan teknis pada kultur bakteri dan amplifikasi gen SOD dengan PCR. Hasil penelitian menunjukkan vektor ekspresi pGWB5-MmSOD berhasil masuk ke dalam bakteri Escherichia coli DH5α dan terjadi transformasi. Keberhasilan ini diperoleh dari koloni bakteri yang tumbuh dan muncul pita setelah amplifikasi dengan PCR.